高效液相色譜儀是分析實驗室常用的測試儀器之一,其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中,難免會出現(xiàn)各種各樣的問題,并將直接影響到所測數(shù)據的準確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚預防和排除這些故障的發(fā)生,就可正確地使用儀器并大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用
高效液相色譜儀中需注意的幾個問題。
1、使用試管的問題:
a、試管的潔凈問題:高效液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法,如果因使用不潔凈的試管,便會影響試驗結果的準確性。例如,在用甲醇作溶劑來溶解樣品時,所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的,因此,在每次進樣時,都有一個保留時間固定的干擾峰存在,后經證實,此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生,換用玻璃試管后,干擾峰消除。
b、塑料試管的溶解問題:近年來,一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便,但是,在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現(xiàn)象,在利用此種試管提取樣品時,有些有機溶劑對管壁有溶解現(xiàn)象,這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生信號,從而干擾樣品的測定。這時,可用相同的實驗條件先行試驗一下,看看不含被抽提物時,提取液在檢測器上能否產生干擾信號,如確有干擾信號存在,就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。
c、被測樣品在試管壁上的吸附問題:這個問題也應引起注意,否則也會影響測試結果的準確性,在治療藥物監(jiān)測中,有些被測藥物如阿米替林,丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上,因此,操作中宜采用聚丙烯管,為防止提取中吸附現(xiàn)象的發(fā)生,可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑,可有效地防止吸附。
2、流動相的問題:
a、流動相的過濾:配制好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒,如果不把它們?yōu)V除掉,就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器,這樣就堵塞了流動相的正常通道,使色譜柱的阻力增加,柱壓升高,柱效下降。碰到這種情況時,要換用經過濾的流動相,并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘,以除去濾片上的堵塞物。
b、流動相的脫氣:流動相在使用前必須脫氣,以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體,否則,這些氣體會使柱填料的性能降低,還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法,如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前常用的脫氣法。水和甲醇混合后會產生大量的氣泡,如果不脫氣就使用,氣泡就會進入色譜柱和檢測器,并將影響分析工作的正常進行。