制備液相色譜中,有三個可以觀察到的狀態(tài):柱壓、檢測器基線、譜圖。通過觀察和記錄這三個狀態(tài)可以監(jiān)測儀器是否正常。若某個狀態(tài)出現(xiàn)異常,故障排查和解決方案如下。
1、柱壓波動
1)吸液管路進氣泡
?、偃軇┎蛔悖鼮V頭吸入空氣,添加溶劑并排氣泡。
?、谖鼮V頭臟了或堵塞,用異丙醇(或5%稀硝酸)清洗。
③溶劑中有氣泡(尤其兩種以上溶劑混合),超聲(或抽濾)脫氣。
2)泵流量不穩(wěn)
?、賳蜗蜷y堵塞,大流速purge,若不能解決,則需拆下單向閥(異丙醇)超聲清洗清洗或更換單向閥。
②柱塞密封圈磨損,更換密封圈。
?、郾妙^污染,柱塞桿往復(fù)活動受阻,清洗泵頭。
3)柱床塌陷,維修或更換色譜柱。
4)流動相混合后吸放熱導(dǎo)致溫度變化,以致柱壓波動,如乙腈和水混合吸熱,甲醇和水混合放熱。若影響實驗結(jié)果,則增加柱溫箱或流動相預(yù)混。
2、柱壓升高或超壓。
逐段排查堵塞的位置:
1)先拆下色譜柱,接上兩通運行,若是色譜柱堵塞:
①進樣后樣品析出,用合適的溶劑反沖色譜柱。
②緩沖鹽析出,用大比例水相的流動相沖洗色譜柱。
?、蹤C械雜質(zhì)堵塞篩板,異丙醇小流速反沖色譜柱。
?、苌V柱污染嚴重,需維修或充填。
2)混合器堵塞,維修或更換。
3)六通閥堵塞,將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處,將閥扳至load狀態(tài),用易溶樣品的溶劑小流速沖洗。
4)壓力傳感器故障,維修或更換。
3、檢測器基線波動
1)基線有規(guī)律波動,且幅度較大,則可能有氣泡持續(xù)進入流通池。排查氣泡來源并用異丙醇沖洗檢測器或色譜柱。
2)基線小幅度規(guī)律波動,可能是檢測器燈能量不足(能量下降后,低波長下靈敏度先下降。
3)基線漂移。
①流動相在此檢測波長下有吸收。更換流動相或改變波長。
?、谏V柱或檢測池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測池,或?qū)z測池中透鏡玻片取出清洗。
4、譜圖重現(xiàn)性差
1)檢查方法設(shè)置,包括流速、梯度、波長。
2)檢查流動相配置是否有誤,A、B兩相是否放反。
3)檢查柱壓與之前是否有差異,若有變化,則前面1和2進行排查。
4)進樣前色譜柱是否*平衡好。
5)樣品溶解方法。